Экспресс-анализ антибиотиков в молоке при помощи тестов 4sensor
Систематический контроль антибиотиков в молоке важен для обеспечения здоровья населения и нормальной работы производителей кисломолочной продукции. Особенность антибиотиков заключается в высокой биологической активности в малых концентрациях и высокой специфичности по отношению к отдельным функциям жизнедеятельности организма. Самая главная опасность заключается в том, что при регулярном получении небольшой дозы антибиотиков с пищей у возбудителей заболевания вырабатывается устойчивость к препаратам, поэтому лечение будет неэффективным. К тому же, антибактериальные препараты оказывают токсичное воздействие на организм человека и способны вызывать аллергические реакции.
От присутствия антибиотиков в молоке страдает не только население, но и производители. Являясь по природе ингибиторами, препараты замедляют процесс сквашивания. При попадании такого молока на линию производства кисломолочной продукции происходит нарушение технологического процесса, поэтому предприятие терпит убытки.
Как антибиотики попадают в молоко?
При борьбе с заболеваниями животных используют различные ветеринарные препараты, в том числе и антибиотики. Антибиотики могут попадать в молоко следующими путями:
Одним из способов определения наличия антибиотиков в молоке является экспресс-анализ при помощи тест-полосок.
Экспресс-контроль антибиотиков в молоке по ГОСТу
Определение антибиотиков в молоке осуществляется в соответствии с ГОСТ 32219-2013 и ГОСТ 32254-2013. Для анализа необходимы следующие расходные материалы и приборы: набор тест-полосок, термостат-инкубатор и считывающее устройство.
Принцип анализа заключается в том, что проба молока вносится в ячейку инкубатора вместе с тест-полоской. Затем в течение 5-8 минут образец проходит этап термостатирования, после чего тестовая полоска помещается в считывающее устройство. Ридер выводит результат в течение 5-10 секунд и показывает наличие или отсутствие антибиотика определенного типа.
Существует 4 типа наборов тестов для анализа:
– набор №1 (для контроля пенициллина/антибиотиков тетрациклиновой группы);
– набор №2 (для контроля стрептомицина);
– набор №3 (для контроля левомицетина);
– набор №4 (для контроля сульфаниламидов).
Перед началом исследования необходимо осуществить пробоподготовку и настройку оборудования. Инкубатор устанавливается на горизонтальной поверхности, температура выбирается в зависимости от используемого набора тестов: 56 °С (±2) для проведения измерений с использованием наборов для экспресс-анализа №1, №2 и №4; 40 °С (±2,0) для проведения измерений с использованием набора для экспресс-анализа №3. Крышка инкубатора всегда находится в закрытом положении, кроме момента внесения проб молока в ячейку.
Необходимо нанести идентификационную отметку на тест-полоску, открыть крышку инкубатора и поместить полоску в секцию. Образец молока перемешивают (без образования пены), отбирают с помощью пипетки и вносят в ячейку, в которой располагается тест-полоска. Крышку инкубатора закрывают. Продолжительность инкубации для набора №1 составляет 2 минуты, для остальных – 8 минут.
После инкубации анализ результатов осуществляют визуально или при помощи считывающего устройства. Применение считывающего устройства не носит обязательный характер, только повышает точность результата. Еще один способ инструментального анализа результатов – использование устройства, совмещающего функции инкубатора и считывающего устройства.
Определение антибиотиков в молоке при помощи 4Sensor
Тест-набор 4Sensor позволяет определить наличие сразу 4 группы антибиотиков: β-лактамов (пенициллина и цефалоспорина), тетрациклинов, левомицетина (хлорамфеникола) и стрептомицина. 4Sensor подходит для работы не только с натуральным молоком, но и с пастеризованным и сухим. Одна коробка позволяет осуществить 96 анализов.
Для проведения исследования необходимы термостат-инкубатор Heatsensor (производитель отмечает, что тесты совместимы только с данным инкубатором) и считывающее устройство Readsensor. Анализ результатов можно произвести визуально, но точность будет ниже.
Анализ осуществляется в соответствии с требованиями ГОСТ.
Термостат-инкубатор Heatsensor может исследовать одновременно 2 образца. Термостат поддерживает оптимальную для анализа температуру – 40 °С. Завершение инкубации сопровождается световым и звуковым сигналами.
Считывающее устройство Readsensor помогает осуществить более точный анализ. Устройство работает как автономно, так и с подключением к компьютеру, возможно подключение мини-принтера. Результаты выводятся через 10 секунд после установки тест-полоски в ячейку для считывания.
Термостат для определения антибиотиков в молоке
Инструментальный экспресс-метод определения антибиотиков
Milk. Instrumental express-method for determination of antibiotics
Дата введения 2015-07-01
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены»
Сведения о стандарте
1 РАЗРАБОТАН Секретариатом ТК 470/МТК 532 «Молоко и продукты переработки молока», Российским союзом предприятий молочной отрасли, ООО «Научно-технический комитет «Молочная индустрия»
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (Росстандарт) (ТК 470)
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 14 ноября 2013 г. N 44)
За принятие проголосовали:
Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97
Код страны по
МК (ИСО 3166) 004-97
Сокращенное наименование национального органа по стандартизации
Минэкономики Республики Армения
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 22 ноября 2013 г. N 2073-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 32254-2013 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2015 г.
ВНЕСЕНО Изменение N 1, утвержденное и введенное в действие Приказом Росстандарта от 22.09.2016 N 1193-ст c 01.01.2017
Изменение N 1 внесено изготовителем базы данных по тексту ИУС N 12, 2016 год
1 Область применения
Настоящий стандарт устанавливает инструментальный экспресс-метод определения наличия антибиотиков: пенициллинов, тетрациклиновой группы, левомицетина (хлорамфеникола), стрептомицина, сульфаниламидов в сыром и термически обработанном молоке.
Пределы обнаружения антибиотиков в молоке при помощи настоящего метода:
Инструментальный экспресс-метод определения наличия антибиотиков позволяет тестировать с достоверностью не менее 95%, т.е. вероятность того, что молоко свободное от антибиотиков даст положительный результат, составляет 5%.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие нормативные документы:
ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования
ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны
ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности
ГОСТ 12.1.019-79** Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты
** На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019-2009.
ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание
ГОСТ 12.4.021-75 Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования
ГОСТ 3145-84 Часы механические с сигнальным устройством. Общие технические условия
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 16317-87 Приборы холодильные электрические бытовые. Общие технические условия
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 26809.1-2014 Молоко и молочная продукция. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу. Часть 1. Молоко, молочные, молочные составные и молокосодержащие продукты
ГОСТ 26809.2-2014 Молоко и молочная продукция. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу. Часть 2. Масло из коровьего молока, спреды, сыры и сырные продукты, плавленые сыры и плавленые сырные продукты
ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний
ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
ГОСТ 32901-2014 Молоко и молочная продукция. Методы микробиологического анализа
3 Термины и определения
В настоящем стандарте применены термины, установленные в [1] и [2].
4 Сущность метода
Метод основан на связывании остаточных количеств антибиотиков, находящихся в испытуемом образце молока, с антителами, вызывающими окрашиваемую иммунохроматическую реакцию с последующим определением интенсивности окраски продуктов биохимической реакции визуальным методом или измерением инструментально при помощи считывающего устройства, позволяющего методом оптического отражения определить степень интенсивности окраски относительно включенного в тестовую полоску контрольного количества антибиотика (предела обнаружения), и выведением на дисплей идентификационных данных о типе определяемого антибиотика и о его наличии или отсутствии в течение 2-8 минут с сохранением идентификационных данных микропроцессором прибора и на приложенной флеш-карте.
5 Средства измерений, вспомогательное оборудование и материалы
Холодильник бытовой, позволяющий поддерживать температуру от 0 °С до 12 °С по ГОСТ 16317;
морозильная камера, позволяющая поддерживать температуру минус (20±2) °С;
считывающее устройство в комплекте с набором калибровочных тестовых полосок для проверки чувствительности функционирования считывающего устройства;
специальное программное обеспечение, позволяющее сохранять данные со считывающего устройства на персональном компьютере в виде электронного лабораторного журнала (по усмотрению);
персональный компьютер (по усмотрению);
принтер (по усмотрению);
часы механические с сигнальным устройством по ГОСТ 3145;
термометр лабораторный стеклянный с диапазоном измерения от 0 °С до 100 °С, ценой деления шкалы 1 °С по ГОСТ 28498;
контрольный образец молока, не содержащий антибиотики ;
набор N 1 для экспресс-анализа пенициллинов/антибиотиков тетрациклиновой группы в молоке, позволяющий проводить анализ с пределом обнаружения, установленным разделом 1 настоящего стандарта, включающий тестовые полоски, контрольный образец пенициллина/антибиотика тетрациклиновой группы, содержащий 0,004 млн (мг/кг) пенициллина G и 0,1 млн (мг/кг) окситетрациклина (или 0,01 млн (мг/кг) тетрациклина) и емкость для разведения контрольного образца ;
набор N 2 для экспресс-анализа стрептомицина в молоке, позволяющий проводить анализ с пределом обнаружения, установленным разделом 1 настоящего стандарта, включающий тестовые полоски, контрольный образец стрептомицина, содержащий 0,1 млн (мг/кг) стрептомицина и емкость для разведения контрольного образца ;
набор N 3 для экспресс-анализа левомицетина (хлорамфеникола) в молоке, позволяющий проводить анализ с пределом обнаружения, установленным разделом 1 настоящего стандарта, включающий тестовые полоски, контрольный образец левомицетина (хлорамфеникола), содержащий 0,00015 млн (мг/кг) левомицетина (хлорамфеникола) и емкость для разведения контрольного образца ;
набор N 4 для экспресс-анализа сульфаниламидов в молоке, позволяющий проводить анализ с пределом обнаружения, установленным разделом 1 настоящего стандарта, включающий тестовые полоски, контрольный образец сульфаметазина, содержащий 0,1 млн (мг/кг) сульфаметазина и емкость для разведения контрольного образца ;
набор N 5 для экспресс-анализа пенициллинов/антибиотиков тетрациклиновой группы/стрептомицина/левомицетина (хлорамфеникола) в молоке, включающий: тестовые полоски, контрольный образец пенициллина/антибиотика тетрациклиновой группы, содержащий 0,004 млн (мг/кг) пенициллина G и 0,1 млн (мг/кг) окситетрациклина (или 0,01 млн (мг/кг) тетрациклина), контрольный образец стрептомицина, содержащий 0,1 млн (мг/кг) стрептомицина, контрольный образец левомицетина (хлорамфеникола), содержащий 0,00015 млн (мг/кг) или 0,0003 млн (мг/кг) левомицетина (хлорамфеникола) и емкость для разведения контрольного образца ;
Инкубаторы, термостаты, ридеры
Инкубаторы и термостаты
1. Термостат EXPERT TET
Expert TET является термостатическим устройством и предназначен для инкубации тестов 4Sensor, Twinsensor и др. Термостат (инкубатор) Expert TET позволяет пользователю самостоятельно устанавливать время (до 240 мин.) и температуру инкубации (от +30 до +80ºС), что делает его универсальным. Это возможно, благодаря наличию цифровой индикации текущей температуры, встроенной клавиатуры и индикаторам рабочего режима.
Устройство можно подключить к бортовой сети автомобиля напряжением 12В или напряжением 24В через разъем прикуривателя с помощью прилагаемого соединительного провода.
2. Инкубатор-термостат
HeatSensor Aerne 230V APP004
Полуавтомат. Служит для инкубации тест-полосок 4Sensor, Twinsensor, Aflasensor и одновременно. Имеются встроенные программы для проведения анализа. Приобретается однократно.
3. Инкубатор-термостат
HeatSensor Octo APP052
Полуавтомат. Служит для инкубации 8 тест-полосок 4Sensor, Twinsensor, Aflasensor одновременно. Имеются встроенные программы для проведения анализа. Приобретается однократно.
4. Инкубатор-термостат
HeatSensor Duo APP032
Полуавтомат. Служит для инкубации 2 тест-полосок 4Sensor, Twinsensor, Aflasensor одновременно. Имеются встроенные программы для проведения анализа. Приобретается однократно.
5. Инкубатор-термостат
Rapid Test Incubator
Термостат Rapid Test Incubator 24/100-240V предназначен для термостатирования экспресс-тестов Betastar 4D. Приобретается однократно.
6. Инкубатор-термостат
MilkSafe
Мини-термостат Milk Safe предназначен для термостатирования экспресс-тестов MilkSafe 4 BTSC. Приобретается однократно.
7. Инкубатор-термостат
DSM Delvotest MiniS
MiniS — термостат со встроенным термодатчиком и функциями таймера. Был специально разработан для инкубирования тестов Delvotest. Температура инкубирования 64°С. Конструктивно это «сухой» термостат, снаружи имеет пластиковый корпус, а внутренний блок инкубации металлический. Прибор предназначен для работы исключительно внутри помещения: температура окружающей среды должна быть от +10°С до +35°С, инкубатор нельзя размещать рядом с открытым окном или на сквозняке.
8. Термостат HMG-GS (тип MINI-T)
Предназначен для термостатирования экспресс-тестов PIONEER. Приобретается однократно.
9. Инкубатор-термостат
Charm ROSA
Инкубатор для тестов определения антибиотиков Charm ROSA — современный автоматизированный прибор для обработки тестов Rosa.Простой в управлении прибор, имеющий возможность одновременной обработки двух/четырех тестов (в зависимости от модификации), отличается высокой скоростью получения результатов, имеет функцию автоматического включения при закрытии крышки и выключения при ее открывании, таймер обратного отсчета времени до конца процесса инкубации, визуальную и звуковую сигнализацию по окончании цикла инкубирования.
Считыватели (ридеры)
Считывающее устройство Ankar-100
ПРЕДНАЗНАЧЕН ДЛЯ ТЕСТОВ: 4Sensor, Twinsensor, Garant
Считывающее устройство Ankar-100 предназначено для инструментального измерения результатов иммунохроматографических экспресс-тестов 4Sensor, Twinsensor, Garant.
Операционная система: Windows CE.
Способ ввода информации: Мышь, клавиатура, стилус.
Имеется термопринтер (возможность распечатки результатов анализа) и SD-карта памяти на 2Гб (возможность сохранения электронного журнала).
Запрос отчетов проведенных анализов возможен по типу тест-полоски, номеру партии, номеру образца или дате считывания.
Считывающее устройство NBGen (ридер NBGen)
ПРЕДНАЗНАЧЕН ДЛЯ ТЕСТОВ: 4Sensor, Twinsensor, Garant
Современное считывающее устройство NBGen на платформе Android, позволяет оценить результаты исследований сырого молока на антибиотики и гарантировать полную их достоверность. Ридер NBGen имеет следующие преимущества:
Ридер MilkSafe™
ПРЕДНАЗНАЧЕН ДЛЯ ТЕСТОВ: MilkSafe
Ридер MilkSafe™ используется для цифровой интерпретации экспресс-тестов MilkSafe™ на наличие остатков антибиотиков и афлатоксинов в молоке.
Считывающее устройство BMZ6000
ПРЕДНАЗНАЧЕН ДЛЯ ТЕСТОВ: PIONEER
Считывающее устройство Charm-EZ
ПРЕДНАЗНАЧЕН ДЛЯ ТЕСТОВ: CHARM
Charm EZ представляет устройство с цветным ЖК-монитором для автоматического электронного считывания результатов анализа, совмещенного с одноместным инкубатором. Charm EZ при чтении тест-полоски самостоятельно выбирает семейство антибиотиков для каждого теста, например Бета-лактамы, Хлорамфеникол и т.д. Прибор автоматически вводит точную калибровку и устанавливает время и температуру, необходимые для инкубации.
Методы определения антибиотиков в молоке. Тест 4sensor (форсенсор)
Молоко относится к основным продуктам питания. Особенно важно оно для детей. Его качество контролируется на государственном уровне. Для этого применяются различные методы и комплексы. Среди последних наиболее популярным является экспресс тест для определения антибиотиков в молоке 4sensor (форсенсор).
Нормативные документы анализа молока
Допустимые пределы содержания в молоке различных веществ указаны во многих документах. В ГОСТ Р 52090-2003 изложены основные требования по органолептическим и физико-химическим показателям, даны ссылки на ГОСТы с нормативами по сортности и прочим характеристикам (в настоящее время отменен, вместо него рекомендуется пользоваться ГОСТ 31450-2013 Молоко питьевое. Технические условия). Микробиологические показатели приведены в СанПин 2.3.2.1078-2001. Здесь же указаны предельные нормы по содержанию радионуклидов, микотоксинов, пестицидов, антибиотиков и прочих токсичных веществ. С 1.05.2014 г. начал действовать Межгосударственный технический регламент ТР ТС 033/2013 «О безопасности молока и молочной продукции». В нем предусмотрено определение в четырех групп антибиотиков.
Инкубатор-термостат HeatSensor DUO
Тест Twinsensor
Тест 4sensor
Считывающее устройство для тест-полосок ANKAR-100
Инкубатор-термостат HeatSensor HS 00647
Термостат TIAS TF
Инкубатор-термостат HeatSensor OCTO
Считывающее устройство для тест-полосок ReadSensor с термопринтером
Также приняты ГОСТы по методике обнаружения в молоке вредных веществ:
ГОСТ 32254-2013 Молоко. Инструментальный экспресс-метод определения антибиотиков
ГОСТ 32901-2014 Молоко и молочная продукция. Методы микробиологического анализа
ГОСТ Р 51600-2010 Молоко и молочные продукты. Микробиологические методы определения наличия антибиотиков
ГОСТ 32219-2013 Молоко и молочные продукты. Иммуноферментные методы определения наличия антибиотиков (ГОСТ Р 53774-2010 с идентичным названием отменен).
Принятие перечисленных выше и многих других документов необходимо по той причине, что молоко загрязняется нежелательными для человека веществами. Это происходит, как неизбежно, так и вследствие халатности производителей.
Среди вредных компонентов, которые попадают в данный продукт, нередко встречаются антибиотики.
Как антибиотики оказываются в молоке?
Коровы болеют довольно часто. Лечат животных разными лекарствами, в том числе, антибиотиками. На сегодняшний день в ветеринарной практике используется более 50 разновидностей препаратов данной группы. В основном, они применяются при респираторных болезнях, мастите (в том числе – для профилактики) и инфекционных заболеваниях. Принятые медикаменты в итоге попадают в молоко, в котором присутствуют не в чистом виде, а в остаточных количествах.
Как показывает практика, в фермерских хозяйствах, после выздоровления коровы, ее продукцию редко проверяют на наличие антибиотиков. По санитарным правилам, после того, как буренку пролечили, полученное от нее молоко надо сливать в течение от 5 до 10 дней (точный срок зависит от вида лекарственного препарата). Сдавать его на молзавод нельзя! Тем не менее, в периоды, когда в общем по стране наблюдается недостаток данного сырья, фермеры, чтобы не терять прибыль, иногда выливают такое молоко в общие бидоны. То есть, разбавляют его. В результате, концентрация антибиотиков действительно снижается, но, все равно, они никуда не исчезают.
Какой вред приносят антибиотики?
Первыми от наличия в сырье антибиотиков страдают производители. Указанные лекарственные препараты являются ингибиторами – они замедляют процесс сквашивания, а то и вовсе прекращают его. Поэтому, если такое молоко попадает на линию производства кисломолочных продуктов, то оно нарушает ход технологического процесса, из-за чего компания терпит убытки. Кстати, по этой причине является непреложным тот факт, что в кисломолочке антибиотики отсутствуют по определению.
Накопление лекарств в организме любого потребителя молока и молокопродуктов, приносит большой вред здоровью человека. Снижается иммунитет, может развиться аллергия (в основном – из-за пенициллина) или дисбактериоз. По некоторым данным – наблюдается увеличение веса. Тетрациклин может стать причиной снижения аппетита, вызвать проктит или гастрит, а также фотосенсибилизацию кожи (повышенную чувствительность к УФ лучам). Он вредит печени и способен нарушить состав крови. Стрептомицин вреден для нервной системы. Левомицетин, который ветеринары применяют довольно часто, угнетает кроветворную систему.
Антибиотики подавляют активность ферментов, изменяют микрофлору человеческого организма, распространяя ее устойчивые виды. Кипячения эти медпрепараты не боятся. В сухом молоке их не меньше, чем в исходном сырье, при сушке они не разрушаются.
Еще одна «бомба замедленного действия» заключается в том, что накопление антибиотиков становится причиной возникновения устойчивости (резистентности) организма по отношению к медикаментам. Поэтому, если, при каком-нибудь (обычно воспалительном) заболевании, человека придется лечить данными препаратами, они окажутся неэффективными.
Методы определения наличия антибиотиков в молоке
Иммунологические и микробиологические методы
К иммунологическим методам относятся экспресс тесты на антибиотики в молоке. Их действие основано на анализе интенсивности реакции специфических рецепторов – белков, связанных с частицами золота. Технология удобная, от лаборанта не требуется специальное химическое образование. Результат получают быстро, в среднем на исследование требуется от 5 до 10 минут. Считывающее устройство не обязательно, в некоторых случаях надо применять инкубатор, для создания необходимой температуры пробы в пределах от + 40 до + 50 град С. Анализ можно делать в полевых условиях, термостаты подключаются к источнику питания 12/24В. Каждый тест рассчитан на определение одной или нескольких (до четырех) групп антибиотиков.
В основу ингибиторных микробиологических методов положено влияние антибиотиков на штаммы микроорганизмов. Наличие медпрепаратов в молоке обнаруживается при диффузии их в агар – определением интенсивности торможения развития тестовых культур, которые были внесены в питательную среду.
Молоко помещают в виалы (небольшие, от 0,3 до 20 мл стеклянные или пластиковые лабораторные флаконы) с питательной средой. В ней содержится штамм бактерий Bacillus strearothermophius calidolactis. А также индикатор кислотности. При росте или снижении рН, он изменяет окраску среды, по которой определяют наличие антибиотиков в пробе.
Виалы инкубируют 3 часа при Т = 64 град С. Если в пробе антибиотиков нет, то бактерии быстро развиваются, кислотность меняется, а вместе с ней – и цвет среды. Если же медикаменты в молоке есть, то они угнетают рост бактерий, рН не меняется, цвет среды остается таким же, как в начале анализа.
Преимущество подобных тестов заключается в возможности в течение одного исследования обнаружить полный спектр антибиотиков и других ингибиторов. Недостаток – сравнительно долгое время работы, обязательное применение инкубатора. Такой способ больше подходит для перерабатывающих предприятий, а не для фермеров. Стоимость ингибиторного микробиологического метода ниже, чем экспресс-теста.
Люминесцентные методы
Эти методы основаны на сенсибилизированной люминесценции ионов Tb (III) и Eu (III). Обычно они применяются для определения медпрепаратов хинолонового и тетрациклинового ряда. Органические лиганды, к которым относятся и антибиотики, характеризуются высокими молярными коэффициентами поглощения. Они интенсивно впитывают энергию возбуждения. При этом, если энергия лиганда в триплетном состоянии больше, чем тот же параметр иона лантанида на резонансном уровне, то она может ему передаваться. Ион возбуждается и начинает излучать кванты света.
Электрохимические методы
Такие способы применяются для обнаружения медикаментов тетрациклиновой группы. Используется ионометрия и амперометрическое титрование. Ионные ассоциаты антибиотиков, с гетерополианионами структуры Кеггина, выступают в роли электродно-активного компонента мембран ионселективных электродов. При амперометрической технологии титрантом является 12-молибдофосфорная кислота. Достоинствами методики являются ее селективность, простота проведения и высокая чувствительность.
Хроматографические методы
Технологии данной группы основаны на определении изменения интенсивности молекулярной постколоночной люминесценции антибиотиков (в основном, тетрациклинового ряда), которая усиливается при образовании комплексов с катионом циркония (IV). Самым эффективным считается метод ВЭЖХ с ультрафиолетовым или флуоресцентным детектированием.
В молочной промышленности применяются, в основном, иммунологические и микробиологические тесты. К первой группе относятся инкубаторные и безинкубаторные способы.
4sensor (Форсенсор)
Назначение форсенсора
Тесты на антибиотики в молоке 4sensor (форсенсор) являются одним из наиболее популярных в данной группе по той причине, что с их помощью можно одновременно определить наличие сразу четырех медикаментов: β-лактамного типа (пенициллина и цефалоспорина), тетрациклиновой группы, левомицетина (хлорамфеникола) и стрептомицина.
Набор рассчитан на работу с различными видами сырья – не только с натуральным молоком, но также с пастеризованным или сухим. Последнее в количестве 10 г смешивается в 90 мл подогретой до 40 град С дистиллированной воды. Можно исследовать сыворотку, в том числе, сухую. Свернувшееся молоко проверять нельзя.
Данный комплект включен в качестве тест-набора №7 в ГОСТ 32219-2013 «Молоко и молочные продукты. Иммуноферментные методы определения наличия антибиотиков» (пункт 3.10, сноска №7). Одна упаковка рассчитана на 96 тестирований.
Устройство форсенсора
Тесты на антибиотики в молоке 4 сенсор состоят из двух компонентов:
Микролунка (пробирка), для пробы молока. В ней имеется определенное количество моноклональных белковых антител (рецепторов), меченых коллоидным золотом.
Тест – полоска хроматографической бумаги. Она представляет собой набор мембран с линиями связывания. Каждая мембрана настроена на определенный вид антибиотиков.
Порядок работы форсенсора
Включить инкубатор Heatsensor. Его можно будет использовать после того, как температура поднимется до 40 град С. На это требуется около 10 минут.
Поставить микролунку в термостат.
В пробирку с реагентами пипеткой добавить 0,2 куб. см. молока. Перемешать его до гомогенизированного состояния. Проба должна быть однородной и жидкой, без расслоения на фазы, осадка или сгустков. Для перемешивания надо 5 раз наполнить лунку и слить содержимое с помощью пипетки. Если пробирок несколько, то для каждой на пипетке должен быть «свой» наконечник. Рекомендуемая температура сырья до помещения в инкубатор – от 4 до 20 град С. Смешивать надо быстро, так как, после добавления молока в микролунку, между находящимися в ней химическими веществами и пробой начинается реакция.
Закрыть крышку инкубатора. Нажать кнопку «Старт». Действия пп. 3 и 4 тоже следует выполнять максимально оперативно.
По истечении 5 минут (этот период называется первая инкубация, отсчет ведется с помощью вмонтированного в Heatsensor таймера), раздаются звуковой и световой сигналы. Выключить установку.
Поместить в микролунку тест-полоску.
Снова нажать «Старт». Продолжить нагрев в течение еще 5 минут (вторая инкубация).
После окончания, выключить прибор, вынуть тест-полоску и положить ее на лист бумаги. Прочитать результат. Это надо сделать в течение 5 минут после окончания анализа, не позже (не зависимо от того, визуально или с помощью Readsensor). Если итоги положительные, их надо подтвердить дополнительным исследованием.
Визуальное считывание результатов работы форсенсора 
Если цвет тестовой линии более интенсивный, чем контрольной, это значит, что результат – отрицательный. Данный антибиотик в пробе молока отсутствует, либо содержится на более низком уровне, чем приведен в справочной таблице. Если же тестовая светлее, чем контрольная, равная ей или вовсе отсутствует, то – положительный. Количество этого препарата соответствует нормативному или больше данного значения.
Таким способом надо проверить состояние всех тестовых полос. Если по какой-то из них невозможно понять, светлее она или такая же, как контрольная, значит, результат по ней считается положительным и требует повторного исследования.
Принцип действия форсенсора
В основу технологии положена комплексообразующая реакция антибиотиков четырех указанных выше групп с меченными коллоидным золотом белковыми рецепторами. После проведения анализа, проводится визуальное, или с помощью специального аппарата, определение наличия рецепторов, которые остались свободными.
Чем больше их осталось свободными, тем, значит, меньше частиц антибиотиков вступили с ними в реакцию, тем ниже содержание медикамента в молоке и, как следствие, тем более интенсивным получается цвет соответствующей тестовой линии. Если же медпрепарата «много», то его частицы связывают все или почти все рецепторы. Так как свободных рецепторов остается «мало» или нет вовсе, то тестовая линия окрашивается ими слабо или совсем не видна.
После того, как молоко нальют в микролунку в термостате и включат прибор на первую инкубацию, находящийся в пробирке реагент суспензируется с пробой. Моноклональные антитела (рецепторы) связываются с веществами, которые проверяются на наличие в молоке (то есть, с антибиотиками).
Через 5 минут нагрева аппарат выключается, и в лунку помещают тест-полоску. Проверяемая жидкость начинает подниматься по полоске, проходя через расположенные на ней зоны поглощения. Если искомых антибиотиков в молоке в достаточном количестве нет, то в этих зонах должны появиться цветные линии. Если есть, то линии окажутся бледными или не появятся совсем, в зависимости от концентрации соответствующего медпрепарата.
Heatsensor
HeatSensor DUO APP032 – это портативный инкубатор-термостат для работы экспресс-методом со всеми тестами Unisensor. Рассчитан на одновременное исследование 2-х проб.
Его основным узлом является металлический нагреватель, расположенный в пластиковом корпусе. Тепловой блок работает по методу электромагнитной индукции. Поддерживает оптимальную для анализа температуру 40 град С, с точностью до плюс-минус 3 град С. По истечению срока инкубации, включается световой и звуковой сигналы. Полоски выбрасываются автоматически. Данные выводятся на дисплей.
Readsensor
Readsensor АРР038 / АРР039 – это считывающее устройство, предназначенное для точного определения наличия антибиотиков по исследованиям, проведенным с помощью любых тест-полосок Unisensor. Работает автономно или с компьютером. Значительно упрощает определение результатов и делает его более точным. Может отправить данные на мини-принтер.
У прибора есть несколько опций, которые выбираются, в зависимости от среды и условий анализа. Предусмотрено 2 рабочих режима: длительный и быстрый (последний запрограммирован по умолчанию). В первом случае надо ввести все показания оператора и реагентов. Во втором – только номер пробы.
Справа на приборе есть выдвижная ячейка с отверстием (прорезью) в центре. В нее вставляется тест-полоска. Чтобы молоко с индикатора не попало в оптическую часть аппарата, пропитанный жидкостью фильтр надо удалить.
Результаты появляются на дисплее через 10 секунд после установки полоски в ячейку и включения устройства в режим считывания.
Регулярное и повсеместное использование экспресс-тестов, как и других технологий определения антибиотиков в молоке, является надежным барьером для проникновения медпрепаратов в организм человека через продукты питания. В конечном итоге, это важный элемент здорового образа жизни населения страны.